توضیحات

محتویات Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit

100 واکنش	اجزای کیت
µl500	Q-ROMAX, 4X
µl400	Pro II Mix
µl100	RTase, Recombinant Reverse Transcriptase, RNase H-
µl150	Positive Control
µl150	Negative Control

 

شرایط نگهداری

شرایط ارسال توسط روژه تکنولوژی چک می شود. پس از دریافت محصول کیت تشخیصی را در دمای ۵±۲۰- درجه سانتی گراد و در تاریکی نگهداری کنید. از انجماد و ذوب مکرر کیت خودداری کنید تا فعالیت آنزیم کاهش نیابد. هنگامی که شرایط نگهداری را رعایت کنید کیت تا پایان تاریخ انقضاء ذکر شده روی لیبل جعبه کیت پایدار می باشد.

موارد مصرف

Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit یک کیت تشخیصی آزمایشگاهی بر اساس واکنش رونوشت بردار معکوس RT-PCR است که برای تشخیص ژن N مربوط به SARS-CoV-2، ژن پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزا A و ژن NS1 ویروس آنفلوانزای B در بیماران مبتلا یا مشکوک به عفونت SARS-CoV-2 یا ویروس آنفلوانزا می باشد. نمونه های مناسب برای این تست از دستگاه تنفسی فوقانی و تحتانی (سواب های نازوفارنکس، سوآب های حلقی (گلو)، سواب های قدامی بینی، شستشوی بینی و آسپیراسیون بینی، خلط و لاواژ برونکوآلوئولار) گرفته می شود. این نمونه ها توسط خود بیمار یا پرسنل خدمات بهداشتی از بیمارانی که علائم کووید-19 یا آنفلوآنزا را دارند، گرفته می شود.

گارانتی

روژه تکنولوژی کارایی تمام اجزای کیت را گارانتی می کند. برای اطلاع بیشتر در انتخاب محصول براساس نیازتان با متخصصین پشتیبانی روژه تماس حاصل فرمایید. چنانچه هر محصولی رضایت شما را جلب نکرد، اگر به دلیل استفاده نادرست از کیت نباشد و مشکل از روند تولید محصول باشد، تیم روژه محصول را برای شما جایگزین می کند.

قابل توجه خریدار محترم

این محصول فقط برای مصارف آزمایشگاهی است و برای مصارف تجاری توصیه نمی شود و حق فروش این کیت و سایر اجزای آن را ندارید. برای اطلاعات بیشتر در مورد مجوز فروش یا توزیع با تیم فروش روژه تماس حاصل فرمایید.

هشدار و اقدامات احتیاطی

• این کیت فقط برای پرسنل واجد شرایطی که برای واکنش RT-PCR موارد تشخیصی آموزش دیده اند، قابل استفاده است.
• دستگاهReal Time-PCR باید به صورت دوره ای سرویس و تمیز شود.
• میزها و دستگاه ها را به صورت دوره ای تمیز کنید.
• از سرسمپلرهای فیلتردار عاری از RNase وDNase استفاده کنید.
• با نمونه ها باید مطابق روشهای ایمنی آزمایشگاه های عفونی رفتار کرد. هنگام دست زدن به مواد و اجزای کیت دستکش بدون پودر لاتکس بپوشید.
• برای تهیه نمونه، آماده سازی و انجام واکنش از فضاهای کاری جداگانه استفاده کنید. در هر یک از این فضاهای کاری، وسایل و تجهیزات جداگانه باید اختصاص داده شود و جهت جریان هوا باید از سمت pre-PCR به سمت post-PCR باشد.
• هنگام استفاده از نمونه های با میزان تیتر بالای ویروسی و کنترل مثبت، مراقب باشید تا از آلودگی محیط آزمایشگاه جلوگیری کنید.
• پس از دست زدن به نمونه ها یا کنترل مثبت، دستکش خود را عوض کنید. نمونه های کنترل مثبت یا لود بالای خود را از سایر مواد واکنش جدا نگهداری کنید.
• از آلوده کردن مواد و تجهیزات محیط کار خود با DNA/RNA و نوکلئازها جلوگیری کنید.
• کیفیت RNA استخراج شده روی کیفیت تست شما اثر می گذارد. اطمینان حاصل کنید که روش استخراج RNA شما با تکنیک رونوشت بردار معکوس RT-PCR سازگار است.
• به منظور حذف نتایج مثبت کاذب به دلیل آلودگی RNA ویروسی در حین استخراج و اطمینان از صحت نتایج، باید در زمان استخراج یک کنترل منفی (استفاده از آب به جای نمونه) استفاده شده و در واکنش PCR تست شود.

اختیاری: در هر ران واکنش PCR یک نمونه کنترل منفی (استفاده از آب به جای نمونه) استفاده کنید.

• لطفا تاریخ انقضاء کیت را یادداشت کنید.
• از ذوب و انجماد مكرر اجزای كیت خودداری شود. اجزای کیت را دور از نور نگهداری کنید.
• برای دفع نمونه ها، طبق مقررات ایمنی دفع زباله های آزمایشگاهی عمل کنید.

کنترل کیفیت

محصول Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit توسط آزمایش های مشخص از پیش تعیین شده برای هر سری ساخت، مطابق با استانداردهای WHO و Clinical an Laboratory Standards Institute مورد ارزیابی قرار می گیرد. برای اطلاع بیشتر از نتایج آزمایش ها می توانید از طریق سایت شرکت و با استفاده از REF و Lot Number کیت خریداری شده درخواستCertificate of Analysis  خود را ثبت کنید تا برای شما ارسال گردد.

شرح محصول

کیت تشخیص مولکولی Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit بر اساس واکنش رونوشت بردار معکوس RT-PCR یک مرحله ایی می باشد. قسمتی از توالی RNA عامل پاتوژن به cDNA تبدیل و سپس به عنوان الگوی واکنش PCR استفاده می شود. محصول PCR حاصل، توسط یک پروب الیگونوکلئوتیدی که با یک رنگ فلورسنت لیبل شده، شناسایی می شود. این کیت، ژن N از SARS-CoV-2 (ویروس کرونا) و همچنین ژن M2 ویروس آنفلوانزای A و ژن NS1 ویروس آنفلوانزا B را شناسایی می کند. سایر بتاکرونا ویروس ها و سویه های دیگر ویروس آنفلوانزا با این کیت شناسایی نمی شوند.

جایگاه انتخاب شده برای طراحی پرایمر و پروب ژن N یک منطقه کاملاً حفاظت شده در بین تمام SARS-CoV-2 را فراهم می کند. ژن N کوید 19 در کانال فلورسانس نارنجی، جایگاه های انتخاب شده برای ژن M ویروس آنفلوانزای A در کانال فلورسانس سبز و ژن NS1 ویروس آنفلوانزای B در کانال فلورسانس زرد شناسایی می شود. این ژن ها در کانال های فلورسانس FAM، Yakima Yellow، Texas Red به ترتیب برای کوید 19، آنفلونزا A و آنفلونزا B شناسایی می شوند. کنترل داخلی یا ژن RNase P در کانال Cy5 شناسایی می شود، همچنین به عنوان کنترلی برای استخراج RNA و بررسی مهار واکنش RT-PCR، استفاده می شود. این تست با دستگاه های Real Time-PCR سازگار می باشد که 4 کانال فلورسانس سبز، زرد، نارنجی و قرمز را شناسایی می کنند.

نکته: به خاطر داشته باشید که برخی از سیستم های Real Time-PCR قبل از انجام Multiplex-PCR باید با رنگ مربوطه کالیبره شوند.

 اطلاعات بیماری زایی

کرونا ویروس ها دارای RNA تک رشته ای مثبت و از خانواده Coronaviridae می باشند. سویه هایHCoV-229E ، HCoV-NL63، HCoV-OC43، MERS-CoV و HCoV-HKU1 باعث ایجاد سرماخوردگی، عفونت دستگاه تنفسی فوقانی، برونشیولیت و ذات الریه در انسان می شود. SARS-CoV-2 یک بتا کرونا ویروس است که در دسامبر 2019 در ووهان، پدیدار شد. این ویروس عامل ایجاد بیماری COVID-19 است. تب، سرفه و مشکلات تنفسی به عنوان شایعترین علائم اولیه این بیماری است، که در ادامه می تواند منجر به ذات الریه و سندرم تنفسی شدید (SARS) شود. ویروس کرونا عمدتا توسط قطرات تنفسی و تماس مستقیم منتقل می شود.

آنفلوانزا یک بیماری عفونی حاد است که توسط ویروس آنفلوانزایA ، B یا تا حدی کمتر، ویروس آنفلوانزا C ایجاد می شود. ژنوم ویروس های آنفلوانزا از یک رشته RNA قطعه قطعه (segmented) با سر منفی تشکیل شده که درون یک کپسید پروتئینی قرار دارد. این ویروس ها در سراسر جهان یافت می شوند. فراگیر شدن آنفلوآنزای نوع A، عمدتاً به دلیل رانش آنتی ژنیک مولکول های هماگلوتینین و نورآمینیداز ایجاد می شود. ویروس های آنفلوانزا نوع B و C تقریباً برای انسان بیماری زا هستند، در حالی که ویروس های آنفلوانزا A طیف گسترده ای از حیوانات خونگرم را آلوده می کنند.

اساس کار

اساس Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit واکنش زنجیره ای پلیمراز رونوشت بردار معکوس یک مرحله ای (One-step Multiplex Real Time RT-PCR) می باشد. این کیت برای تشخیص کیفی ژن N از SARS-CoV-2 (ویروس کرونا) و همچنین ژن M2 ویروس آنفلوانزای A و ژن NS1 ویروس آنفلوانزا B طراحی شده است. پس از تخلیص ژنوم با استفاده از RNJia Virus Kit (Cat No: RN983072) و یا کیت های دیگر دارای تاییدیه وزارت بهداشت، می توان مخلوط نمونه را مستقیماً به مسترمیکس، میکس پرایمر و پروب و آنزیم RTase اضافه کرد تا واکنش انجام شود. کنترل داخلی، ژن RNase P انسانی را هدف قرار می دهد که با کمک آن نمونه گیری، کیفیت استخراج نمونه و روند انجام واکنش RT-PCR را برای جلوگیری از نتایج منفی کاذب، می توان بررسی و کنترل کرد. حداقل حساسیت کیت به ترتیب 200 نسخه بر میلی لیتر برای کروناویروس و 150 نسخه بر میلی لیتر برای آنفلونزای A و B است.

كنترل هاي موجود

• كنترل منفي: يك كنترل بدون الگو جهت بررسي وجود يا عدم وجود آلودگي در واكنش RT-PCR در هر ران كاري مورد استفاده قرار می گیرد.
• كنترل مثبت: يك الگو از نمونه مثبت جهت بررسي عملكرد مناسب واكنش RT-PCR در هر ران كاري می باشد.
• كنترل داخلي (RNase P): براي بررسي کیفیت استخراج نمونه، وجود ممانعت کننده های فرآیند RT-PCR و انجام واكنش RT-PCR در هر نمونه مورد استفاده قرار می گیرد.

 تجهیزاتی که باید توسط کاربر آماده شوند

• سواب برای گرفتن نمونه با یک سر از جنس نایلون یا داکرون با دسته آلومینیومی یا پلاستیکی
• میکروتیوب های ۵/۱ میلی لیتری عاری از نوکلئازهایRNase و  DNase
• استریپ یا میکروتیوب های ۲/۰ یا ۱/۰ میلی لیتری برای انجام PCR
• انواع سایزهای سمپلر و سرسمپلر (سرسمپلرهای فیلتردار از قبیل µL۱۰، µL ۱۰۰، و µL ۱۰۰۰)
• محلول ضدعفونی کننده سطح مانند RNZO (Cat NO:RN983048)
• دستکش فاقد پودر و گان جراحی یک بار مصرف
• انواع دستگاه های Real-time-PCR (دارای کانال های سبز، زرد، نارنجی و قرمز)
• سانتریفیوژ (که توانایی رسیدن به دورrpm ۱۳۰۰۰ را داشته باشد)
• میکروسانتریفوژ
• ورتکس
• کول باکس

آماده سازی محیط کار

تمامي سطوح كاري، سمپلرها، سانتريفيوژها و ساير ملزومات قبل از استفاده تميز و ضدعفوني گردد. باید از تركيبات ضدعفوني كننده نظير هيپوكلريت سديم ۱۰٪، اتانول ۷۰٪ و یا RNZO (Cat NO:RN983048) جهت كاهش خطر آلودگي با اسيدنوکلئیک استفاده کرد.

جمع آوری نمونه

Viga SARS-CoV-2 and Influenza A/B Molecular Diagnostic Kit کیت تشخيص همزمان اسيدنوكلئيك ویروس SARS-CoV-2 Influenza A/Influenza B/ در نمونه هاي تنفسي می باشد. نمونه ها بايد فاقد هر گونه آلودگي در مرحله نمونه برداري، نگهداري و انتقال باشند. نمونه ها بايد آلوده در نظر گرفته شوند و جابه جايي آنها بايد با رعايت نكات کامل ایمنی زیستی صورت گيرد. سواپ هاي نمونه گیری بايد از نوع نايلون يا داكرون و با دسته آلومينيومي يا پلاستيكي باشد. سواپ هاي پنبه اي به هيچ وجه توصيه نمي شود. بعد از نمونه گیری، سواپ ها بايد فورا در داخل محیط های مناسب انتقال ویروس نگهداری شوند.

نگهداری و انتقال نمونه ها

در صورت نگهداری نمونه ها در ۴ درجه سانتي گراد، بايد ظرف ۲۴ ساعت آزمايش انجام شود. نمونه هايي كه ظرف ۲۴ ساعت امكان آزمايش ندارند بايد در دماي۷۰- درجه سانتي گراد يا كمتر نگهداري شوند، (در شرايطي كه دماي ۷۰- امكان پذير نيست نمونه ها مي توانند بمدت ۱۰ روز در دماي ۲۰- و اسيدنوكلئيك یا ژنوم تخلیص شده ویروس مي تواند بمدت ۱۵ روز در دمای ۵ ±۲۰- درجه سانتي گراد نگهداري شوند). از ذوب و انجماد مكرر نمونه ها اجتناب کنید.

استخراج نمونه

به منظور استخراج اسيدنوكلئيك ويروسي می توان از کیت RNJia Virus Kit (Cat No: RN983072) و یا کیت های دیگر دارای تاییدیه وزارت بهداشت استفاده كرد.

مراحل کار

تمامي اجزاء كيت را خارج كرده و در دماي اتاق قرار داده تا به دماي اتاق برسد. سپس هر كدام از آنها را قبل از مصرف، ورتكس مختصری نماييد. حجم نمونه تخلیص شده مورد استفاده در این تست باید ۱۰ میکرولیتر باشد. مطابق جدول 1 اجزای واکنش را آماده کرده و طبق جدول 2 برنامه Real-time PCR را اجراء کنید.

جدول 1: آماده سازی اجزای واکنش به ازای یک واکنش

حجم	اجزاء مورد نیاز
µl 5	Q-ROMAX
µl 1	RTase, Recombinant Reverse Transcriptase, RNase H-
µl 4	Pro II Mix
µl 10	Isolated RNA

 

 

جدول2 : برنامه دمایی one-step Multiple Real Time-RT-PCR

مرحله	زمان	دما	تعداد سیکل
سنتز cDNA	۲۰ دقیقه	۵۰ درجه سانتی گراد	۱
فعال شدن آنزیم پلی مراز	۱ دقیقه	۹۵ درجه سانتی گراد	۱
واسرشته شدن	۱۰ ثانیه	۹۵ درجه سانتی گراد	45 سیکل
اتصال و تکثیر اسید نوكلئيك و اندازه گیری میزان فلورسانس در کانال های سبز، زرد، نارنجی و قرمز	۴۰ ثانیه	۶۰ درجه سانتی گراد

 

 

دستگاههای Real Time PCR

این کیت بر روی دستگاههای زیر قابل اجرا می باشد

• Rotor-Gene Q, 5plex
• Corbett Rotor-Gene 3000&6000
• Mic qPCR Cycler
• ABI StepOne&StepOnePlus
• Roche LightCycler® 96 Real-Time PCR System
• Anatolia Montania 484 Real-Time PCR Instrument

 

نکته: اطلاعات بیشتر برای برنامه دستگاه Real-time PCR را می توان در راهنمای دستگاه مطالعه کرد. توجه داشته باشید که برخی از دستگاه های PCR باید قبل از واکنش Multiplex-PCR با رنگ های موردنظر کالیبر شوند.

This post is also available in: English