توضیحات

محتویات کیت تشخیص SARS-COV

100 واکنش	اجزای کیت
µl500	Q-ROMAX, 4X
µl400	Pro I Mix
µl100	RTase, Recombinant Reverse Transcriptase, RNase H-
µl150	Positive Control
µl150	Negative Control

 

شرایط نگهداری

شرایط ارسال توسط روژه تکنولوژی چک می شود. پس از دریافت محصول کیت تشخیصی را در دمای ۵±۲۰- درجه سانتی گراد و در تاریکی نگهداری کنید. از انجماد و ذوب مکرر کیت خودداری کنید تا فعالیت آنزیم کاهش نیابد. هنگامی که شرایط نگهداری را رعایت کنید کیت تا پایان تاریخ انقضاء ذکر شده روی لیبل جعبه کیت پایدار می باشد.

موارد مصرف

کیت تشخیص مولکولی ویروس کرونا جدید(SARS-CoV-2:COVID-19) ، تست رونوشت بردار معکوس از نوع Real Time-PCR است که برای تشخیص کیفی ویروس SARS-CoV-2 از نمونه سواب های نازوفارنکس، سواب های حلقی (گلو)، سواب های قدامی بینی، شست و شوی بینی و آسپیراسیون بینی، که توسط پرسنل مراکز خدمات بهداشتی و درمانی از افراد مشکوک به کوید ۱۹ گرفته می شود، مورد استفاده قرار می گیرد. این تست باید توسط آزمایشگاه های دارای مجوز تشخیص مولکولی کوید ۱۹ انجام شود.

طبق قوانین وزارت بهداشت فروش کیت مذکور تنها به آزمایشگاه های دارای مجوز امکان پذیر می باشد. تنها برای استفاده اضطراری و فقط برای استفاده در شرایط آزمایشگاهی (IVD) می باشد. تست حاضر برای شناسایی ژنوم SARS-CoV-2 مورد استفاده قرار می گیرد. ژنوم SARS-CoV-2 معمولاً در نمونه های تنفسی افرادی که در مرحله حاد عفونت هستند، قابل تشخیص است. نتایج مثبت نشان دهنده وجود ژنوم  SARS-CoV-2است؛ سابقه علائم بالینی بیمار و سایر اطلاعات تشخیصی برای تعیین وضعیت آن لازم می باشد. هرچند نتایج مثبت وجود عفونت باکتریایی یا عفونت همزمان با ویروس های دیگر را رد نمی کند، همچنین آلودگی به ویروس کرونا ممکن است عامل اصلی علائم بالینی مشاهده شده نباشد. آزمایشگاه های تشخیص مولکولی کوید ۱۹ باید تمام نتایج مثبت را به مقامات بهداشتی گزارش دهند. نتایج منفی، وجود عفونت SARS-CoV-2 را قاطعانه رد نمی کند و نباید به عنوان تنها عامل تصمیم گیری برای وضعیت بیماران باشد. نتایج منفی باید با مشاهدات بالینی، سابقه بیمار و اطلاعات اپیدمیولوژیکی تلفیق شوند.

گارانتی

روژه تکنولوژی کارایی تمام اجزای کیت را گارانتی می کند. برای اطلاع بیشتر در انتخاب محصول براساس نیازتان با متخصصین پشتیبانی روژه تماس حاصل فرمایید. چنانچه هر محصولی رضایت شما را جلب نکرد، اگر به دلیل استفاده نادرست از کیت نباشد و مشکل از روند تولید محصول باشد، تیم روژه محصول را برای شما جایگزین می کند.

قابل توجه خریدار محترم

این محصول فقط برای مصارف آزمایشگاهی است و برای مصارف تجاری توصیه نمی شود. حق فروش این کیت و سایر اجزای آن مختص به روژه می باشد. برای اطلاعات بیشتر در مورد مجوز فروش یا توزیع با تیم فروش روژه تماس حاصل فرمایید.

هشدار و اقدامات احتیاطی

برگه ایمنی مواد برای همه ی اجزای کیت در سایت روژه قرار دارد و از طریق لینک زیر قابل دسترس است www.rojetechnologies.com. کاربران گرامی لطفا هنگام کار، اقدامات احتیاطی ایمنی زیستی زیر را رعایت کنید:

لطفاً قبل از استفاده، دستورالعمل داخل کیت را به دقت مطالعه كنید.

تمام نمونه های بیمار و کنترل های مثبت باید به طور بالقوه عفونی در نظر گرفته شوند.

از خوردن، نوشیدن، سیگار کشیدن، استفاده از مواد آرایشی یا استفاده از لنزها در مناطقی که مواد واکنش دهنده و نمونه های انسانی استفاده می شود، خودداری کنید. تمام نمونه ها را با احتمال و به عنوان اینکه نمونه های عفونی هستند، با استفاده از روش های آزمایشگاهی ایمن مدیریت کنید.

قبل از شروع فرایند، دستورالعمل های ایمنی زیستی در ارتباط با نمونه ویروس کوید 19، را در سایت https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab-biosafety-guidelines.html مطالعه کنید.

کیت تشخیصی کرونا ویروس جدید (Viga SARS-CoV-2 Molecular Diagnostic Kit)، تنها برای استفاده اورژانسی با تجویز پزشک به عنوان یک تست تشخیص آزمایشگاهی (IVD) می باشد.

هر مرحله از فرآیند، نظیر نمونه گیری، نگهداری، حمل و نقل، و انجام تست آزمایشگاهی، باید کاملاً مطابق با مقررات مربوط به ایمنی زیستی و مدیریت آزمایشگاه مولکولی انجام شود.

فضاهای آزمایشگاهی جداگانه و اختصاصی با توجه به انجام تست مورد نیاز است:

فضای 1: منطقه آماده سازی- که در آن آماده سازی مواد واکنش تست انجام می شود.

فضای ۲: پردازش نمونه- که در آن تخلیص نمونه ها و کنترل ها انجام می شود.

فضای ۳: منطقه تکثیر که در آن تست Real Time-PCR انجام می شود.

آزمایشگاه بالینی باید کاملاً مطابق با الزامات مربوطه که در مقررات وزارت بهداشت ذکر شده اند، به دستگاه ها و اپراتورها مجهز شوند.

تمام محتویات موجود در کیت برای هدف آزمایش(nCoV-2019)  تهیه و تأیید شده است. جایگزینی یا تغییر هر یک از محتویات بسته، عملکرد کیت را تحت تأثیر قرار می دهد و در مغایرت با مجوز استفاده محصول است.

قبل از شروع هر آزمایش، هر یک از اجزاء باید کاملا ذوب شده و به طور مختصر ورتکس و سانتریفیوژ شوند. از تکرار چرخه انجماد و ذوب خودداری کنید.

تمام سرسمپلرها و میکروتیوب ها باید استریل و عاری از DNase و RNase باشند. برای ممانعت از آلودگی، سرسمپلرهای فیلتردار مورد نیاز است و باید بعد از افزودن هر ماده یا نمونه عوض شوند.

زباله ها را با رعایت مقررات ایمنی زیستی دفع کنید. تمام میزکار و وسایل آزمایشگاهی باید به طور مرتب با استفاده از اتانول ۷۰٪ یا هیپوکلریت سدیم ۱۰٪ تمیز و ضد عفونی شود.

از قرار دادن مخلوط مواد PCR کوید-۱۹، در معرض نور خودداری کنید.

آزمایشگاه های تشخیصی ملزم هستند تمام نتایج مثبت را به مقامات بهداشتی گزارش دهند.

کنترل کیفیت

محصول Viga SARS-CoV-2 Molecular Diagnostic Kit توسط آزمایش های مشخص از پیش تعیین شده برای هر سری ساخت، مطابق با استانداردهای WHO و Clinical an Laboratory Standards Institute مورد ارزیابی قرار می گیرد. برای اطلاع بیشتر از نتایج آزمایش ها می توانید از طریق سایت شرکت و با استفاده از REF و Lot Number کیت خریداری شده درخواستCertificate of Analysis  خود را ثبت کنید تا برای شما ارسال گردد.

شرح محصول

کیت تشخیصی Viga SARS-CoV-2 Molecular Diagnostic Kit، تست واکنش زنجیره ای پلیمراز رونوشت بردار معکوس (rRT-PCR) است. از نمونه سواب های نازوفارنکس، سواب های حلقی (گلو)، سواب های قدامی بینی، شست و شوی و آسپیراسیون بینی، که توسط پرسنل مراکز خدمات بهداشتی و درمانی از افراد مشکوک به کوید ۱۹ گرفته می شود، مورد استفاده قرار می گیرد. پرایمر و پروب های 2019-nCoV برای شناسایی ژنوم SARS-CoV-2 در نمونه های تنفسی بیمارانی طراحی شده اند که از نظر پرسنل مراکز بهداشتی خود، مشکوک به COVID-19 هستند.

اساس کار

اساس Viga SARS-CoV-2 Molecular Diagnostic Kit واکنش زنجیره ای پلیمراز رونوشت بردار معکوس یک مرحله ای (One-step Multiplex Real Time RT-PCR) می باشد. این کیت برای تشخیص کیفی ژن های RdRp وN  از ژنومSARS-CoV-2  طراحی شده است. پس از تخلیص ژنوم ویروس با استفاده از RNJia Virus Kit (Cat No: RN983072) و یا کیت های دیگر دارای تاییدیه وزارت بهداشت، می توان مخلوط نمونه را مستقیماً به مسترمیکس، میکس پرایمر و پروب و آنزیم RTase اضافه کرد تا واکنش انجام شود. کنترل داخلی، ژن RNase P انسانی را هدف قرار می دهد که با کمک آن نمونه گیری، کیفیت استخراج نمونه و روند انجام واکنش RT-PCR را برای جلوگیری از نتایج منفی کاذب، می توان بررسی و کنترل کرد. حداقل حساسیت کیت ۱۰۰ نسخه در میلی لیتر است.

كنترل هاي موجود

كنترل منفي: يك كنترل بدون الگو جهت بررسي وجود يا عدم وجود آلودگي در واكنش RT-PCR در هر ران كاري مورد استفاده قرار می گیرد.

كنترل مثبت: يك الگو از نمونه مثبت جهت بررسي عملكرد مناسب واكنش RT-PCR در هر ران كاري می باشد.

كنترل داخلي (RNase P): براي بررسي کیفیت استخراج نمونه، وجود ممانعت کننده های فرآیند RT-PCR و انجام واكنش RT-PCR در هر نمونه مورد استفاده قرار می گیرد.

تجهیزاتی که باید توسط کاربر آماده شود

• سواب برای گرفتن نمونه با یک سر از جنس نایلون یا داکرون با دسته آلومینیومی یا پلاستیکی
• میکروتیوب های ۵/۱ میلی لیتری عاری از نوکلئازهایRNase و  DNase
• استریپ یا میکروتیوب های ۲/۰ یا ۱/۰ میلی لیتری برای انجام PCR
• انواع سایزهای سمپلر و سرسمپلر (سرسمپلرهای فیلتردار از قبیل µL۱۰، µL ۱۰۰، و µL ۱۰۰۰)
• محلول ضدعفونی کننده سطح مانند RNZO (Cat NO:RN983048)
• دستکش فاقد پودر و گان جراحی یک بار مصرف
• انواع دستگاه های Real Time-PCR (دارای کانال های سبز، زرد و نارنجی)
• سانتریفیوژ (که توانایی رسیدن به دورrpm ۱۳۰۰۰ را داشته باشد)
• میکروسانتریفوژ
• ورتکس
• کول باکس

آماده سازي محیط کار

تمامي سطوح كاري، سمپلرها، سانتريفيوژها و ساير ملزومات قبل از استفاده تميز و ضدعفوني گردد. باید از تركيبات ضدعفوني كننده نظير هيپوكلريت سديم ۱۰٪، اتانول ۷۰٪ و یا RNZO (Cat NO:RN983048) جهت كاهش خطر آلودگي با اسيدنوکلئیک استفاده کرد.

جمع آوري نمونه

Viga SARS-CoV-2 Molecular Diagnostic Kit کیت تشخيص كيفي اسيدنوكلئيك ویروس SARS-CoV-2 در نمونه هاي تنفسي می باشد. نمونه ها بايد فاقد هر گونه آلودگي در مرحله نمونه برداري، نگهداري و انتقال باشند. نمونه ها بايد آلوده در نظر گرفته شوند و جابه جايي آنها بايد با رعايت نكات کامل ایمنی زیستی صورت گيرد. سواپ هاي نمونه گیری بايد از نوع نايلون يا داكرون و با دسته آلومينيومي يا پلاستيكي باشد. سواپ هاي پنبه اي به هيچ وجه توصيه نمي شود. بعد از نمونه گیری، سواپ ها بايد فورا در داخل محیط های مناسب انتقال ویروس نگهداری شوند.

نگهداري و انتقال نمونه ها

در صورت نگهداری نمونه ها در ۴ درجه سانتي گراد، بايد ظرف ۲۴ ساعت آزمايش انجام شود. نمونه هايي كه ظرف ۲۴ ساعت امكان آزمايش ندارند بايد در دماي۷۰- درجه سانتي گراد يا كمتر نگهداري شوند، (در شرايطي كه دماي ۷۰- امكان پذير نيست نمونه ها مي توانند بمدت ۱۰ روز در دماي ۲۰- و اسيدنوكلئيك یا ژنوم تخلیص شده ویروس مي تواند بمدت ۱۵ روز در دمای ۵ ±۲۰- درجه سانتي گراد نگهداري شوند). از ذوب و انجماد مكرر نمونه ها اجتناب کنید.

استخراج نمونه

به منظور استخراج اسيدنوكلئيك ويروسي می توان از RNJia Virus Kit (Cat No: RN983072) و یا کیت های دیگر دارای تاییدیه وزارت بهداشت استفاده كرد.

مراحل کار

تمامي اجزاء كيت را خارج كرده و در دماي اتاق قرار داده تا به دماي اتاق برسد. سپس هر كدام از آنها را قبل از مصرف، ورتكس مختصری نماييد. حجم نمونه تخلیص شده مورد استفاده در این تست باید ۱۰ میکرولیتر باشد. مطابق جدول 1 اجزای واکنش را آماده کرده و طبق جدول 2 برنامه Real Time-PCR را اجراء کنید.

جدول1: آماده سازی اجزای واکنش به ازای یک واکنش

حجم	اجزاء مورد نیاز
µl 5	Q-ROMAX
µl 1	RTase, Recombinant Reverse Transcriptase, RNase H-
µl 4	Pro I Mix
µl 10	Isolated RNA

 

جدول 2: برنامه دمایی One-step Multiplex Real Time-RT-PCR

مرحله	زمان	دما	تعداد سیکل
سنتز cDNA	۲۰ دقیقه	۵۰ درجه سانتی گراد	۱
فعال شدن آنزیم پلی مراز	۱ دقیقه	۹۵ درجه سانتی گراد	۱
واسرشته شدن	۱۰ ثانیه	۹۵ درجه سانتی گراد	۴۵ سیکل
اتصال و تکثیر اسیدنوكلئيك و اندازه گیری میزان فلورسانس در کانال های سبز؛ زرد و نارنجی	۴۰ ثانیه	۶۰ درجه سانتی گراد

 

دستگاههای Real Time PCR

این کیت بر روی دستگاههای زیر قابل اجرا می باشد

• Rotor-Gene Q, 5plex
• Corbett Rotor-Gene 3000&6000
• Mic qPCR Cycler
• ABI StepOne&StepOnePlus
• Biorad CFX96 Real-Time PCR
• Roche LightCycler® 96 Real-Time PCR System
• Anatolia Montania 484 Real-Time PCR Instrument

نحوه تفسیر نتایج بالینی

• تجزیه و تحلیل داده ها باید به صورت جداگانه برای هر هدف (ژن) با استفاده از تنظیم آستانه دستی (Manual threshold) انجام شود. خط آستانه برای هر نمونه باید در فاز نمایی منحنی های فلورسانس و بالاتر از هر سیگنال پس زمینه (Background) قرار بگیرد.
• فلوروفور FAM (سبز) برای ژنRDRP ، فلوروفور Texas Red (نارنجی) برای ژن N و فلوروفور HEX (زرد) برای ژنRNase-P (کنترل داخلی) است.
• کنترل منفی (NTC) به عنوان کنترل آلودگی استفاده می شود. مقدار افزایش فلورسانس منحنی در کنترل منفی از مرز آستانه عبور نمی کند. اگر Ct کمتر از 35 باشد به عنوان آلودگی احتمالی در نظر گرفته می شود. سیگنال های قوی بالای Ct 35 در NTC می توانند(PCR artifacts) باشند که در این مواقع می توان شکل منحنی را در نظر گرفت (منحنی S شکل تیپیکال نتیجه مثبت می باشد).
• کنترل داخلی یا ژن RNaseP باید در 35 Ct یا قبل از آن برای همه نمونه های بالینی مثبت باشد، که نشان دهنده وجود اسید نوکلئیک کافی از ژن RNase P انسان است و نمونه از کیفیت قابل قبولی برخوردار است.
• منحنی کنترل داخلی یا ژن RNase P با Ct> 40یا بدون Ct نشان دهنده غلظت پایین نمونه یا مواد ممانعت کننده در واکنش است (که توصیه می شود نمونه تخلیص شده حداقل ۲/۱ رقیق شود). اگر هنگام آزمایش مجدد، نتیجه تست دوباره مورد پذیرش نمی باشد، باید یک نمونه تازه دیگر از بیمار گرفته شود و تست تکرار شود.
• نمونه بالینی مثبت باید ≤ 40 Ct برای هر یک از ژن ها یا دو ژن مثبت داشته باشد.
• در صورت عدم دستیابی به واکنش مثبت مورد انتظار (منحنی S شکل تیپیکال)، آزمایش انجام شده مورد پذیرش نمی باشد و با رعایت دقیق دستورالعمل های کیت، تست را دوباره تکرار کنید.
• علت عدم موفقیت در واکنش کنترل مثبت را تعیین کنید، اقدامات اصلاحی را انجام دهید و نتایج اقدامات اصلاحی را مستند کنید.

جدول3: شرایط قابل قبول برای کنترل مثبت و منفی

RdRp (FAM)	N (Texas Red)	IC (HEX)	Results
+	+	در نظر گرفته نمی شود	Positive control*
+	–
–	+
–	–	+	Negative control
–	–	–	نامعتبر و مورد پذیرش نمی باشد

Result of (-): Ct value >40 or Undetermined, Result of (+): Ct value ≤ 40*

محدودیت ها

• در صورت وجود تیتر پائین ویروس در نمونه بیمار، حمل و نقل نامناسب، یا عدم کیفیت تخلیص ممکن است یک نتیجه منفی کاذب گرفته شود.
• ژنوم ویروس کرونا از نوع RNA می باشد که تنوع ژنتیکی قابل توجهی را نشان می دهد. اگرچه سعی در طراحی پرایمر و پروب برای مناطق حفاظت شده از ژنوم ویروسی شده است، اما این تنوع ژنتیکی می تواند باعث عدم اتصال مناسب بین پرایمر/ پروب و توالی هدف باشد، که این منجر به نتایج منفی کاذب می شود.
• تمامي كنترل ها مي بايست قبل از تفسير نتايج بررسي شوند. اگر كنترل ها معتبر نباشند، نتايج بيماران نمي تواند تفسير شود. ميزان حد تشخيص اين كيت برابر Ct≤40 مي باشد و همچنين نياز است كاربر قبل از تفسير نهايي منحنی های فلورسانس را بررسي کند. تمام منحنی های مثبت بايد پيك تكثيري (S) شكل داشته باشند.
• عدم رعايت شرايط مناسب نگهداري كيت مي تواند منجر به نتايج منفي كاذب شود.
• استفاده از اين کیت نياز به پرسنل مجرب و آموزش ديده دارد و هر گونه خطاي پرسنلي مي تواند منجر به نتايج نامعتبر گردد.
• نتايج حاصل از اين كيت تشخيصي تنها در كنار شواهد باليني براي تشخيص SARS-CoV-2 مورد قبول می باشد. تشخيص قطعي و درمان بيماران بايد بر اساس تركيب نتيجه اين آزمايش با نتايج آزمايش هاي ديگر و سابقه پزشكي و همچنين نحوه پاسخ دهي به درمان صورت گيرد.
• از محدودیتهای کیت ارایه شده میتوان به عدم تمییز بین انواع جهش یافته ویروس sars-cov-2 مثل نوع انگلیسی یا آفریقایی را نمیتواند تمییز دهد و‌همه انواع جهش یافته شناخته شده از این ویروس فقط به عنوان کرونا مثبت شناسایی میشوند.

This post is also available in: English