کیت تشخیص مولکولی HBV به روش کمی Real-Time PCR

توضیحات

محتویات Viga Quantitative HBV Molecular Diagnostic Kit

اجزاء کیت	25 واکنش	۱۰۰ واکنش
Pro HBV Mix	220µl	875µl
QD-ROMAX, 4X	160µl	625µl
IC	125µl	500µl
HBV *QS1(1×104 IU/µl)	65µl	250µl
HBV *QS2(1×103 IU/µl)	65µl	250µl
HBV *QS3(1×102 IU/µl)	65µl	250µl
HBV *QS4(1×101 IU/µl)	65µl	250µl
Water for Molecular Biology	125µl	500µl

^*استاندارد کمی

شرایط نگهداری

تمام اجزای Viga Quantitative HBV Molecular Diagnostic Kit محلول­های آماده برای استفاده هستند. پس از دریافت باید در دمای 30- تا 15- درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

موارد مصرف

Viga Quantitative HBV Molecular Diagnostic Kit، جهت تست تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت B مورد استفاده قرار می­گیرد. اساس کار این محصول Quantitative Real Time-PCR می­باشد و فناوری تشخیص و تعیین کمی DNA ویروس هپاتیت B انسانی ( (HBVاز (ژنوتیپ­های A تا H) در پلاسمای انسانی را دارد. تمامي مواد موجود در کیت باید منحصراً در تشخيصIn vitro  به كار برده شوند.

گارانتی

روژه تکنولوژی کارایی تمام اجزای کیت را گارانتی می­کند. برای اطلاع بیشتر در انتخاب محصول براساس نیازتان با متخصصین پشتیبانی روژه تماس حاصل فرمایید. چنانچه هر محصولی رضایت شما را جلب نکرد، اگر به دلیل استفاده نادرست از کیت نباشد و مشکل از روند تولید محصول باشد، تیم روژه محصول را برای شما جایگزین می­کند.

قابل توجه خریدار محترم

این محصول فقط برای مصارف آزمایشگاهی است و برای مصارف تجاری توصیه نمی­شود و حق فروش این کیت و سایر اجزای آن را ندارید. برای اطلاعات بیشتر در مورد مجوز فروش یا توزیع با تیم فروش روژه تماس حاصل فرمایید.

هشدار و اقدامات احتیاطی

• قبل از اولین استفاده، محصول و اجزای آن را از نظر تعداد و حجم بررسی کنید. از محصول معیوب یا ناقص استفاده نکنید، عملکرد آن ممکن است تحت تاثیر قرار گیرد.
• از انواع دیگر نمونه جز پلاسمای انسانی استفاده نکنید! استفاده از انواع دیگر نمونه­ها ممکن است عملکرد محصول را به خطر بیندازد.
• وجود مهار­کننده­های PCR (به عنوان مثال هپارین) ممکن است نتایج منفی یا نامعتبر کاذب ایجاد کند.
• شرایط نامناسب نگهداری ممکن است عملکرد محصول را به مخاطره بیندازد.
• عدم سانتریفوژ اجزای محصول پس از ذوب شدن می­تواند منجر به آلودگی اجزای سازنده با باقی­مانده­های واکنشگر­ها در درب تیوب شود و در نتیجه عملکرد محصول در معرض خطر قرار گیرد.
• از فریز و دفریز متوالی پرهیز کنید.
• از اجزای محصول بیش از تاریخ انقضای چاپ شده روی برچسب اجزاء استفاده نکنید.
• استفاده نادرست از اجزاء و نمونه­های محصول ممکن است منجر به آلودگی شده که نتایج نادرست تشخیص آزمایشگاهی را به همراه دارد.
• درب ویال­ها را جابجا نکنید، زیرا ممکن است آلودگی متقاطع ایجاد شود.
• برای به حداقل رساندن خطر انتقال آلودگی، مواد مثبت و یا مواد بالقوه مثبت، از سایر اجزای کیت جدا نگهداری شود.
• از مناطق کاری جداگانه استفاده کنید.
• همیشه دستکش یکبار مصرف بپوشید.
• درب تیوب­هایPCR  را برای جلوگیری از آلودگی با امپلیکون­ها باز نکنید.
• زمان ذخیره­سازی PCR Mix را بیشتر نکنید. این می­تواند عملکرد محصول را به مخاطره بیندازد.
• همیشه با نمونه­ها به عنوان عوامل عفونی و خطرناک زیستی، طبق روش­های آزمایشگاهی ایمن رفتار کنید. به عنوان مثال بعد از نشت مواد به سرعت از ضد عفونی کننده مناسب استفاده کنید. مواد آلوده را به عنوان مواد زیستی خطرناک جا­بجا کنید.
• زباله­های زیستی و خطرناک را مطابق با قوانین محلی و بین المللی دفع کنید تا از آلودگی محیط زیست اجتناب شود.
• مانند هر تست تشخیصی، نتایج باید با در نظر گرفتن تمام یافته­های بالینی و آزمایشگاهی تفسیر شود.
• موتاسیون­های بالقوه درون توالی هدف ژنوم HBV که توسط پرایمر پروب­های درون کیت پوشش داده شده است، ممکن است موجب عدم تشخیص حضور پاتوژن شود.

كاربر بايد هميشه به نكات زير توجه كند:

• استفاده از سرسمپلرهای فیلتردار وRNase & DNase free
• نگهداری و تخلیص مواد مثبت برای هپاتیتB  (نمونه­های گرفته شده از مریض، کنترل­ها و محصولات حاصل از PCR) باید در محلی کاملا جدا از محل نگهداری و آماده سازی مسترمیکس HBV صورت پذیرد.
• همه مواد مورد نیاز کیت قبل از شروع کار باید به طور کامل در دمای اتاق ذوب شود.
• بعد از ذوب کردن مواد آنها را مخلوط کرده و به طور مختصر سانتریفوژ کنید. این امر برای جلوگیری از کاهش عملکرد کیت در طی زمان به طور کامل توصیه می­شود.
• تمام مراحل مربوط به تهیه مسترمیکس باید بر روی یخ یا باکس­های سرد(cooling box)  انجام شود. استوک اصلی مربوط به مسترمیکس بعد از برداشتن مقدار مورد نیاز از آن باید به سرعت به فریزر منتقل شود.

کنترل کیفیت

محصول Viga Quantitative HBV Molecular Diagnostic Kit توسط آزمایش­های مشخص از پیش­ تعیین شده برای هر سری ساخت، مطابق با استانداردهای WHO و Clinical an Laboratory Standards Institute مورد ارزیابی قرار می­گیرد. برای اطلاع بیشتر از نتایج آزمایش­ها می­توانید از طریق سایت روژه و با استفاده از REF و Lot Number کیت خریداری شده درخواستCertificate of Analysis  خود را ثبت کنید تا برای شما ارسال گردد.

وسایلی که باید توسط کاربر تامین گردد

• هنگام كار با مواد شيميائي، هميشه روپوش مناسب آزمايشگاهي، دستكش يكبار مصرف، و عينك­هاي محافظ داشته باشيد.
• ورتکس
• دستکش بدون پودر (یکبار مصرف)
• لوله­هاي 0.2 ml براي استفاده در روتور ۳۶ چاهكي یا لوله­هاي ml1/0 براي استفاده در روتور 72 چاهكي
• كيت جداسازيDNA  (کیت تخلیص (DNJia Virus DNA Kit
• سمپلر قابل تنظيم
• نوك سمپلر فيلتردار
• سانتريفیوژ روميزي
• بلوك خنك كننده
• دستگاه­های Real Time-PCR

این کیت بر روی دستگاه­های زیر قابل اجرا می­باشد

• Rotor-Gene Q, 2plex
• Corbett Rotor-Gene 3000&6000
• Mic qPCR Cycler

 

کاربرد

Viga Quantitative HBV Molecular Diagnostic Kit یک کیت تشخیص مولکولی برای تشخیص و تعیین مقدار DNA ویروس هپاتیت B در پلاسمای انسان است. این امر مبتنی بر فناوری Real Time-PCR می­باشد که برای تکثیر ژنوم ویروس هپاتیت B از پرایمرهای خاص و پروب­های خاص دارای برچسب فلورسنت استفاده می­شود.

محدودیت­ها

تمامي مواد موجود در کیت باید منحصراً در تشخيصIn vitro  به كار برده شوند. اين محصول بايد توسط پرسنلي استفاده شود كه آموزش­های لازم جهت کار در بخش مولکولی را دیده باشند. پيروي اكيد از راهنماي استفاده از کیت برای نیل به نتايج بهينه PCR ضروری است. بايد به تاريخ­هاي انقضاي چاپ شده بر روي جعبه توجه گردد و اجزاي منقضي شده را از رده مصرف خارج نمود.

آماده سازی اجزای واکنش (کنترل داخلی در مرحله تخلیص برای تایید جداسازی DNA و بررسی مهار PCR اضافه شده است) به ازای یک واکنش

اجزاء مورد نیاز	حجم
Pro HBV Mix	8.75µl
QD-ROMAX, 4X	6.25µl
Purified DNA	10µl

 

مقادیر لازم برای آماده­سازی هر لوله استاندارد در جدول زیر آورده شده است.

Standards	Volume per tube	(Pro HBV Mix + QD-ROMAX, 4X) تهیه مسترمیکس به ازای یک واکنش
HBV QS1	10µl	15µl
HBV QS2	10µl	15µl
HBV QS3	10µl	15µl
HBV QS4	10µl	15µl

 

مقادیر لازم برای آماده سازی هر لوله تست در جدول زیر آورده شده است.

Volume per tube of unknown sample	(Pro HBV Mix + QD-ROMAX, 4X) تهیه مسترمیکس به ازای یک واکنش
10µl	15µl

 

مقادیر لازم برای آماده­سازی هر لوله کنترل منفی در جدول زیر آورده شده است.

Volume per tube of water*	(Pro HBV Mix + QD-ROMAX, 4X) تهیه مسترمیکس به ازای یک واکنش
10µl	15µl

 

برنامه دمایی هر قسمت در جدول زیر آورده شده است.

stage	Temperature	Incubation Time	Cycle Numbers
Pre-Denaturation	95 °C	5 min	1
Denaturation	95 °C	10 sec	5
Annealing and Extension	58°C	60 sec
Denaturation	95 °C	10 sec	40
Annealing and acquisition on channel Green and Yellow	58°C	60 sec

 

نمونه­های کنترل برای یک ران PCR قابل قبول

کنترل	کانال شناسایی کننده
	FAM™ (HBV target)	VIC™ (Internal Control)
استاندارد کمی (استاندارد/ مثبت)	+	مورد قبول نیست
کنترل منفی NTC	–	+

 

پارامترهای کنترل کننده نمودار استاندارد

پارامترهای کنترل کننده	مقادیر معتبر
R square (R2)	0.98≥

 

This post is also available in: English